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從有限的細胞中提取 RNA 實驗

提供者:上海雅吉生物科技有限公司   發布時間:2019/3/18  閱讀次數:24次   進入該公司展臺

實驗材料LCM 帽子
試劑、試劑盒乙醇 糖原RNA 提取試劑盒 超純水
儀器、耗材移液器
實驗步驟
一、材料
 
1. 緩沖液、試劑和溶液
 
75% 乙醇 (超純水配制)
 
糖原,5 mg/ml(Ambion,Austin,TX)
 
StratageneRNA 提取試劑盒(200345,StratageneCloningSystems,LaJolla,CA),
 
包括變性溶液、飽和酚 (存于 4°C)、β-巰基乙醇 (存于 4°C)、氯仿:異戊醇、
 
2mol/L 乙酸鈉、異丙醇。或者使用 PicoPureRNA 分離試劑盒(KIT0202,Arcturus,
 
MountainView,CA)
 
DEPC 處理的超純水 (BiotecxLaboratories,Houston,TX)(4°C 儲存)
 
2. 特殊設備
 
移液器
 
無 RNA 酶的 1.5 ml 管子
 
3. 細胞和組織
 
來自方案 3 的 LCM 帽子
 
二、方法
 
1. 加入 200ul 變性溶液和 1.6ulβ-巰基乙醇到 0.5 ml 管子中。
 
2. 將 LCM 帽子插入管子,渦旋 5s。
 
3. 倒置管子孵育 5 min。
 
4. 移去 LCM 帽子。這一步獲得的樣品可以在-80°C 保存 6 個月。
 
5. 將溶液轉移到 1.5 ml 管子中。
 
6. 加入 2ul2mol/L 的乙酸鈉,溫和混勻。
 
7. 加入 220ul 水飽和的酚(底層),溫和混勻。
 
8. 加入 60ul 氯仿:異戊醇,劇烈晃動。
 
9. 放于冰上 15 min。
 
10.14000r/min4°C 離心 30 min。
 
11. 吸上層溶液到新管子中。
 
12. 加入 2ul 糖原(最終濃度 10~150ug/ml)。
 
13. 加入 200ul 冷異丙醇。
 
14.-80°C 過夜。

關鍵詞:提取  RNA  實驗  

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